Секвенирование линейной амплифицированной ДНК

Секвенирование линейной амплифицированной ДНК * секвеніраванне лінейнай ампліфікаванай ДНК * linear amplification DNA sequencing — техника секвенирования нативной двунитчатой ДНК после ее амплификации методом ПЦР. Очищенную ДНК и меченый по 51-концу секвенирующий прймер смешивают с четырьмя реакционными средами для секвенирования по Сэнгеру (см.) и добавляют Taq ДНК-полимеразу. Реакционные смеси помещаются в амплификатор, и по заданной температурной программе осуществляется многократная денатурация и отжиг матричной ДНК и праймеров. Удлинение праймера Taq-полимеразой идет до тех пор, пока инкорпорированный дидезокситринуклеотидфосфат не остановит реакцию. В результате образуется серия амплифицированных фрагментов, которые могут быть разделены электрофоретически на специальном геле для секвенирования. Метод позволяет определять до 500 и более оснований за один цикл и не требует большого количества ДНК.